1、检测原理

（1）基于细胞病变的微量细胞中和试验法（CPENT法）

本实验室以RSV的A2亚型及B亚型毒株为研究对象，采用Hep-2细胞，建立了呼吸道合胞病毒中和抗体检测的微量细胞中和试验法。该方法将系列稀释的样品、对照品加至96孔板，再将稀释至特定滴度的病毒液加至96孔板，共孵育1h后，接种至单层Hep-2细胞，37℃、5%CO2培养5d，观察细胞病变情况（CPE），记录各孔是否出现CPE，通过累积阳性孔数、累积阴性孔数，采用Reed-Muench法计算中和抗体效价。

                  Hep-2                                    Hep-2（RSV感染）

（2）基于RSV-GFP重组病毒的微量细胞中和试验法（FRNT法）

同时用RSV-A2-GFP及RSV-B-GFP重组病毒感染Hep2细胞模型，通过检测重组病毒感染后GFP表达水平，建立了呼吸道合胞病毒中和抗体检测的微量细胞荧光中和试验法。

                  Hep-2（RSV-GFP病毒感染）

2、材料溯源：

       可溯源细胞：ATCC

       可溯源病毒：RSV A2、RSV B、RSV A2-GFP、RSV B-GFP均测序验证

3、方法学验证：

1）验证结果：

       注：CPE微中和法检测RSV-F Neutralizing Antibody IC50为0.6130 μg/ml（参考效价0.6-2.3μg/ml）。

（2）线性及线性范围：

       以RSV企业质控品的不同浓度为横坐标，各稀释度下的中和抗体滴度为纵坐标，绘制线性图谱，线性方程为y=16584x-134.1，线性方程的R2=0.9891（R2≥0.95），符合接受标准。

（3）CPENT法及FRNT法相关性分析：

4、优势

       （1）材料可溯源

       （2）经过系统、完善的方法学验证，检测结果准确可靠、重复性好

       （3）CPENT法为传统“金标准”检测方法

       （4）FRNT法高通量、更高效、检测周期短，且与CPENT法相关性好

       （5）可出具CNAS报告

5、服务范围

       样本类型：动物血清，人血清、单抗、药物

       可提供服务阶段：非临床阶段/临床阶段

       服务周期：FRNT法（5-7个工作日），CPENT法（10-14个工作日）

       报告类型：科研报告、CNAS报告